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豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測試劑盒

試劑盒由抗原包被板、血清稀釋板、酶標(biāo)二抗及其它試劑制成，利用間接ELISA方法檢測豬血清中存在的豬2型圓環(huán)病毒特異性抗體，從而對豬2型圓環(huán)病毒疫苗免疫效果做出評價。

分類：

詳細(xì)信息

豬圓環(huán)病毒2型間接ELISA抗體檢測試劑盒   Indirect ELISA Kit For Porcine Circovirus Type 2 Antibody
使用說明書
 
【簡    介】
　　試劑盒由抗原包被板、血清稀釋板、酶標(biāo)二抗及其它試劑制成，利用間接ELISA方法檢測豬血清中存在的豬2型圓環(huán)病毒特異性抗體，從而對豬2型圓環(huán)病毒疫苗免疫效果做出評價。
【用    途】
　　適用于豬圓環(huán)病毒2型疫苗的免疫后評價。
【原    理】
　　本試劑盒利用豬圓環(huán)病毒2型核衣殼蛋白(Cap)包被微孔板。在試驗中，若待測血清樣品中含有抗圓環(huán)病毒2型的特異性抗體，則將與檢測板上抗原結(jié)合，形成抗原-抗體復(fù)合物。之后加入的酶標(biāo)二抗將與檢測板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合，并可使TMB底物溶液形成藍(lán)色產(chǎn)物。顯色反應(yīng)經(jīng)終止液終止后呈黃色，最終通過測定450nm波長下吸光度得到結(jié)果。
【試劑盒主要成分】 
1 抗原包被板 2塊   96孔/塊
2 陰性對照血清 1管  50µl/管
3 陽性對照血清 1管  50µl/管
4 酶標(biāo)二抗 2管  0.2ml/管
5 25倍濃縮洗滌液 1瓶  25ml/瓶
6 底物溶液A 1瓶  10ml/瓶
7 底物溶液B 1瓶  10ml/瓶
8 終止液 1瓶  10ml/瓶
9 樣品稀釋液 2瓶  30ml/瓶
10 血清稀釋板 2塊   96孔/塊
11 說明書 1張
【樣品制備】
　　取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。
【試劑配制】
　　使用前，試劑盒內(nèi)除酶標(biāo)二抗外的各種試劑都應(yīng)恢復(fù)到室溫（25?C左右）。25倍濃縮的洗滌液恢復(fù)至室溫或略微加熱后搖動使沉淀的鹽溶解，然后用去離子水作25倍稀釋，稀釋好的洗滌液在2～8?C可以存放7天。酶標(biāo)二抗在使用前用樣品稀釋液按1:100倍稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用。
【樣品稀釋】
　　標(biāo)準(zhǔn)樣品與待檢樣品均在血清稀釋板中按1:50倍的體積稀釋（推薦稀釋方法：245µL樣品稀釋液中加5µL
待檢血清樣品）。
【操作步驟】 
1、取抗原包被板，先加入50µL樣品稀釋液，再將稀釋好的待檢樣品和對照樣品各取50µL加入到抗原包被板孔中，用移液器輕輕吹打混勻。陰性對照和陽性對照各設(shè)2孔，置37?C溫育30分鐘。
2、甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200µL，靜置1分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共洗3次。
3、每孔加入稀釋好的酶標(biāo)二抗100µL，置37?C溫育30分鐘。
4、甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200µL，靜置1分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共洗3次。
5、每孔加入等體積混合好的底物溶液A 與底物溶液B 100µL ，避光顯色10分鐘。
6、每孔加終止液50µL，10分鐘內(nèi)測定450nm波長吸光度。
【結(jié)果判定】 
  參考農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《2013年國家動物疫病強(qiáng)制免疫計劃》的通知，被檢抗體正向間接血凝實(shí)驗抗體效價≥25為陽性。根據(jù)該通知制定結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：
 
1 實(shí)驗結(jié)果同時滿足下列條件，方為有效：
標(biāo)準(zhǔn)陽性對照孔平均OD450nm≥0.6±0.02。
標(biāo)準(zhǔn)陰性對照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。
2 疫苗免疫后抗體水平檢測結(jié)果的判定：
樣品OD450nm≤0.3，判為圓環(huán)病毒2型抗體陰性。
樣品OD450nm＞0.3，判為圓環(huán)病毒2型抗體陽性。
樣品OD450nm處于0.3±0.02臨界值范圍內(nèi)，建議重復(fù)檢測，以確保結(jié)果準(zhǔn)確。
3 對豬圓環(huán)病毒2型免疫保護(hù)力檢測結(jié)果的判定：
樣品OD450nm≤0.3，判為無保護(hù)力，所檢樣品對圓環(huán)病毒2型感染無保護(hù)力。
樣品OD450nm介于0.3與0.6之間，判為保護(hù)力低下，所檢樣品抗體水平較低，對流行毒株有一定保護(hù)力。
樣品OD450nm≥0.6，判為有保護(hù)力，所檢樣品抗體水平較高，在攻毒試驗中可提供高于90%的抵抗力。
樣品OD450nm處于0.3±0.02或者0.6±0.02臨界值范圍內(nèi)，建議重復(fù)檢測，以確保結(jié)果準(zhǔn)確。
 
【注意事項】
1  本底過高可導(dǎo)致結(jié)果整體水平偏高，實(shí)驗過程需保證二抗清洗干凈，或?qū)嶒炛刑砑涌瞻讓φ铡?/span>
2  環(huán)境溫度低于15?C可導(dǎo)致結(jié)果整體水平偏低，實(shí)驗過程需保證環(huán)境溫度盡量接近25?C，或適當(dāng)延長底物液顯色時間。
3  底物液A和底物液B不要暴露于強(qiáng)光，避免接觸氧化劑。 
4  濃縮洗滌液用去離子水稀釋，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，應(yīng)水浴加熱使其溶解。
5  酶標(biāo)二抗應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。
6  4?C過夜孵育樣品及酶標(biāo)二抗可以獲得更好的結(jié)果。
 
【貯  存】  2～8?C避光保存 
【有 效 期】  9個月
【生產(chǎn)企業(yè)】  重慶澳龍生物制品有限公司
【地  址】  重慶市榮昌區(qū)板橋工業(yè)園區(qū)四支路五號      
【郵  編】  402460
【技術(shù)服務(wù)】  023-46763511                
【銷售熱線】  023-46761801

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