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詳細(xì)信息
【名稱】
通用名：牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒熒光PCR檢測試劑盒(探針法)
商品名：無
英文名稱：Lumpy skin disease virus Real-time PCR test (Probe)
【用 途】
適用于動物皮膚損傷病灶、皮膚結(jié)痂、唾液、眼鼻等分泌物、奶、精液、糞便、媒介生物等樣品中牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒的特異性檢測。
【主要成分與含量】
| 序號 | 產(chǎn)品組分 | 規(guī)格 |
| 1 | LSDVPCR反應(yīng)液（含探針） （棕色管） | 1管（1.2mL） |
| 2 | LSDV陽性對照 （紅蓋管） | 1管（100μL） |
| 3 | LSDV陽性對照 （綠蓋管） | 1管（100μL） |
| 4 | 使用說明書 | 1份 |
注意：不同批號的組分不互換使用，試劑盒中組分使用前需充分混勻并離心（建議采用輕彈或顛倒的方式混勻，不建議采用渦旋振蕩器混勻），應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融！
【熒光PCR儀器適用范圍】
ABI7500Fast、ABI7500、Q5等系列，Roche系列，BIO-RAD系列等熒光定量PCR檢測儀等。
1樣本前處理
①牛病料：剪取50~100mg牛病料組織，加入含500μLPBS或生理鹽水的研缽中緩慢研成勻漿，或采取組織冷凍研磨儀進行研磨，將研磨后的勻漿液轉(zhuǎn)移到無RNA酶污染的滅菌離心管中，6000rpm離心30s；取上清液備用。
②唾液、結(jié)節(jié)潰爛時產(chǎn)生的分泌物、奶和精液：直接取樣本6000rpm離心1min；取上清液備用。
2樣品DNA提取（樣本處理區(qū)）
取上述前處理后的樣本，按常規(guī)方法提取病毒DNA，也可采用商品化試劑盒提取病毒DNA。陰性對照參與提取，以對環(huán)境進行監(jiān)控。陽性對照無需提取，直接使用。
3 PCR體系配制
3.1 取出試劑盒，從中取出實驗所需試劑，融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著的液體；
3.2 根據(jù)不同PCR儀選擇反應(yīng)管或反應(yīng)板，反應(yīng)總體積為25μL，反應(yīng)液在配液區(qū)配制，加樣在樣品處理區(qū)，測試反應(yīng)體系配制如下表：
| 組分反應(yīng)管 | 檢測管 | 對照管 | |
| 陽性對照 | 陰性對照 | ||
| LSDVPCR反應(yīng)液（含探針） | 20μL | 20μL | 20μL |
| LSDV陽性對照 | - | 5μL | - |
| LSDV陰性對照 | - | - | 5μL |
| 樣品DNA | 5μL | - | - |
| 總體積 | 25μL | 25μL | 25μL |
4 擴增（檢測區(qū)）
按下列參數(shù)設(shè)置反應(yīng)條件：
| 反應(yīng)參數(shù) | 預(yù)變溫度 | 45個循環(huán) | |
| 變性 | 退火/延伸 | ||
| 溫度 | 95℃ | 95℃ | 58℃ |
| 時間 | 3min | 10sec | 34sec |
熒光信號采集設(shè)定在退火/延伸時。對于多通道熒光PCR儀，選擇熒光素FAM為信號采集通道，淬滅基因選None，染料校正選None。
5 結(jié)果判斷
5.1 實驗成立條件
5.1.1 陰性對照：無特異性擴增曲線或Ct值＞45.0，或無Ct值。
5.1.2 陽性對照： Ct值應(yīng)＜28.0，且出現(xiàn)明顯的S型擴增曲線。
5.2 結(jié)果判定
5.2.1 陽性：樣品檢測結(jié)果Ct值≤40.0，而且出現(xiàn)明顯的S型擴增曲線，表明樣品中檢出牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒核酸。
5.2.2 陰性：樣品檢測結(jié)果Ct值＞45.0或無特異性S型擴增曲線，表明樣品未檢出牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒核酸。
5.2.3 可疑：樣品檢測結(jié)果Ct值在：40.0~45.0范圍，應(yīng)對樣本進行復(fù)檢。如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在40.0~45.0范圍，有明顯指數(shù)增長，則判定為陽性，否則為陰性。
【注意事項】
1 實驗前請仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書，嚴(yán)格按操作步驟執(zhí)行。
2 所有試劑應(yīng)在規(guī)定的溫度儲存，詳細(xì)信息見試劑標(biāo)簽。
3 為了避免交叉污染，請盡可能在無核酸酶的環(huán)境下操作，并將試驗過程分區(qū)進行（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴增區(qū)等）。
4 配制PCR反應(yīng)體系時應(yīng)盡量避免氣泡產(chǎn)生，擴增前應(yīng)檢查反應(yīng)管是否蓋緊，以免反應(yīng)液泄露污染儀器。
5 為保證實驗結(jié)果準(zhǔn)確，樣品盡量保證新鮮采集，2~8℃運輸，長途運輸請使用干冰。
6 所有試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融。
【儲存條件及有效期】
試劑盒于-20℃保存，有效期為12個月。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
試劑盒采用的引物及探針與正在送審的國家標(biāo)準(zhǔn)采用的引物及探針一致。試劑盒檢測臨床樣本的最低敏感性為2拷貝/μL。
【規(guī)格】 50頭份/盒
【生產(chǎn)企業(yè)】 重慶澳龍生物制品有限公司
【地 址】 重慶市榮昌區(qū)板橋工業(yè)園區(qū)四支路五號
【郵 編】 402460
【技術(shù)服務(wù)】 023-46763511
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